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免疫复合物在体内存在有两种方式,一是存在于血液中的循环免疫复合物(CIC),
一是组织中固定的免疫复合物。免疫复合物的检测技术可分为抗原特异性方法和非抗原特异性方法。
在大多数情况下,免疫复合物中的抗原性质不太清楚或非常复杂,所以抗原特异性方法并不常用。
一、循环免疫复合物的检测
根据免疫复合物的物理学、免疫学和生物学特性,已经设计出很多检测CIC的方法(表24-4),
本章只述及常用的代表性方法。
表24-4 循环免疫复合物的常用检测方法
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类别 |
原理 |
方法 |
敏感性 |
备注 |
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物理法 |
分子大小 |
1.超速离心 |
- |
适于研究 |
| 2.分子超滤 |
- |
适于研究 |
| 3.凝胶过滤 |
30μg |
适于研究 |
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溶解度 |
1.PEG沉淀 |
20μg |
粗定量,易推广 |
| 2.冷沉淀 |
- |
定性,临床应用 |
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补体法 |
固定补体,
结合C1q |
抗补体试验 |
0.1μg |
常用,特异性差 |
| 1.C1q凝胶沉淀试验 |
100μg |
定性,不易普及 |
| 2.C1q偏离试验 |
4μg |
不易普及 |
| 3.液相法 |
10μg |
不易普及 |
| 4.固相法 |
1μg |
不易普及 |
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胶固素 |
胶固素结合试验 |
3μg |
敏感,稳定 |
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抗Ig法 |
结合RF |
1.RF凝胶沉淀试验 |
100G |
定性,不敏感 |
| 2.mRF固相抑制试验 |
1~20μg |
不易普及 |
| 3.PRF凝集抑制试验 |
1~10μg |
不易普及 |
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结合Ig |
抗抗体法 |
2~3μg |
不易普及 |
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细胞法 |
Fc受体 |
1.血小板凝集试验 |
1~4μg |
需新鲜制备 |
| 2.ADCC抑制试验 |
5~10μg |
细胞活性质控难 |
| 3.Mφ吞噬抑制试验 |
0.03μg |
细胞活性质控难 |
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补体受体 |
1.Raji细胞法 |
6μg |
需维持细胞株 |
| 2.花环抑制试验 |
10μg |
影响因素多 |
(一)物理测定法
1.聚乙二醇法聚乙二醇(PEG)是乙二醇聚合而成的无电荷形多糖分子,分子量变化范围较大,常用的分子量是6000。
用3%~4%浓度的PEG可以选择性地将大分子免疫复合物沉淀下来,其作用机制尚不甚清楚。将PEG溶液与待检血清混合,
置4℃冰箱过夜后离心,将沉淀物用PEG溶液充分洗涤,重新溶解于0.01mol/L的NaOH中,在波长280nm下测量溶液的吸光度;也可利用散射比浊
法直接测定PEG沉淀的免疫复合物;以不同浓度的热聚合IgG作为参考标准来计算CIC的含量。
聚乙二醇法简单易行,可在临床工作中推广。但此法易受多种大分子蛋白和温度的干扰,特异性稍差。PEG法还特别适用于沉淀获得CIC,再进行解离分析其中的抗原与抗体。
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