类风湿关节炎(RA)特异的诊断标记一直是研究的热点，国外的研究表明抗角蛋白抗体(AKA)、抗核周因子(APF)和类风湿因子(RF)在RA具有诊断意义［1］。本研究旨在探索AKA、APF和RF对RA诊断的意义。
　　1.研究对象：RA患者46例，男性15例，女性31例，年龄11～65(平均39.5)岁；其他风湿性疾病患者90例；健康成人49例。从以上对象采取静脉血。
　　2.检测方法：(1)AKA检测方法：取Wistar大鼠食管中下1/3段做冰冻切片，厚4 μm，加1∶20稀释血清，湿盒内37℃孵育30分钟，PBS漂洗，吹干，加1∶20稀释的荧光素标记羊抗人IgG,37℃孵育30分钟，漂洗，吹干，缓冲甘油封片，荧光显微镜下观察。结果以角质层出现规则的线状或板层状荧光为阳性。(2)APF检测：刮取人颊黏膜细胞混匀，PBS洗涤3次后涂片，每片约400～1 000个细胞，加1∶10稀释血清，室温下孵育90分钟，PBS漂洗，吹干，加1∶20稀释的荧光素标记羊抗人IgG，室温孵育30分钟，洗3次。以1∶1含0.5 μg/ml溴化乙锭甘油/PBS液封固作核复染色，荧光显微镜下观察结果。核周胞浆中出现圆形或椭圆形荧光颗粒者为阳性。(3)RF检测：用乳胶凝集法检测IgM型RF，血清以1∶20为起点稀释，出现肉眼可见的颗粒为阳性。
　　3.结果：(1)AKA、APF和RF的阳性率：AKA、APF和RF在RA组阳性率分别为41.3%、50.0%和78.2%，在其他风湿病组分别为2.2%、4.4%和16.7%，在健康成人组分别为2.0%、4.0%和2.0%。AKA、APF和RF在RA组的阳性率均显著高于其他风湿病组和健康成人组(P<0.001)。3种抗体对RA的特异性分别为97.8%、95.7%和88.5%。(2)同时具有2种、3种抗体的阳性率：AKA、APF和RA 3种抗体同时阳性者仅在RA组有8例(17.4%)。该3种抗体同时有2种阳性者在RA组占21例(45.7%)，在其他风湿病组仅占2例(2.2%)，而健康组无一例出现。2种和3种抗体同时阳性在RA组为63%，对RA的特异性可达98.6%。(3)AKA、APF和RF的相关性：在36例RF阳性的RA血清中，AKA阳性16例，APF阳性19例；在10例RF阴性的RA血清中，AKA阳性3例，APF阳性4例；在19例AKA阳性血清中，11例APF阳性；27例AKA阴性血清中，12例APF阳性。对RF和AKA、RF和APF以及AKA和APF之间进行一致性检验，P值均>0.3，说明AKA、APF和RF互无相关性。
　　讨论　1979年Young等［2］发现RA血清中有一种能与鼠食管角质层反应的抗体，并对RA具有特异性，命名为AKA。其后，许多学者进行了研究，但未得到一致的结论。1989年Vincent等［3］对结果的判定提出了新的见解，认为只有角质层呈现线状或板层状的强荧光，而棘层或基底层细胞不出现荧光或荧光较弱时，AKA对RA方有特异性。同时提出应将AKA更名为抗角质层抗体更为恰当。我们发现对照血清组角质层多无荧光着色或荧光较弱，而出现强荧光者多伴有棘层、基底层的强荧光，尤其是棘层的点状强荧光，以往可能是由于判断标准的不一致造成了结论的不一致。APF是1964年Nienhuis在RA血清中发现的一种抗人颊黏膜细胞浆内角质蛋白颗粒的抗体，荧光显微镜下在胞浆内呈一个或多个大小不等的圆形或椭圆形颗粒，其对RA的特异性随血清稀释倍数的增加而增加。我们发现AKA在RA的阳性率为41.3%，特异性为97.8%。而APF、RF的敏感性较AKA高，但特异性不及AKA，分别为95.7%、88.5%。若把3种抗体结合起来，在RA 2种和3种抗体同时阳性时，阳性率和特异性可进一步提高。RA至今缺乏特异性的实验室诊断指标，在疾病早期，临床诊断往往困难，常延误最佳的治疗时机。AKA、APF和RF均可在病程的早期出现，这为RA的早期诊断提供了有力依据［1，4］。把AKA、APF和RF联合起来，作为RA诊断的辅助实验室诊断项目，在一定程度上可弥补RF对RA诊断的不足，特别是对RF阴性RA具有补充诊断意义。

　　作者单位：100853 北京，解放军总医院风湿科

参考文献

　1　Aho K, Palusuo T, Kuiki P. Marker antibodies of rheumatoid arthritis: diagnostic and pathogenetic implications. Semin Arthritis Rheum, 1994, 23:379-387.
　2　Young BJ, Mailya RK, Leslie RD, et al. Antikeratin antibody in rheumatoid arthritis. Br Med J, 1979, 2:97-99.
　3　Vincent C, Serre G, Lapayre F, et al. High diagnostic value in rheumatoid arthritis of antibodies to the stratum corneum of rat oesophagus epithelium, so-called “antikeratin antibodies.” Ann Rheum Dis, 1989, 48:712-722.
　4　Saraux A, Valls I, Voisin V. How useful are tests for rheumatoid factors, antiperinuclear factors, antikeratin antibody and the HLA-DR4 antigen for the diagnosis of rheumatoid arthritis? Rev Rheum Engl Ed, 1995,62:16-20.