1965年Wa1Rer等首次应用间接免疫荧光法(IIF )，发现原发性胆汁性肝硬化(primarybiliary cirrhosis, PBC)患者血清中存在抗线粒体抗体(anti-mitochondrial antibodies, AMA),,其后研究发现，AMA是一种以线粒体为靶抗原、无种属和器官特异性的自身抗体，PBC患者中的AMA阳性率可高达95%，此项检测已成为PBC诊断的重要实验室指标。80年代初期，应用免疫印迹技术发现，PBC患者血清能与不同种系的多种组织细胞的线粒体自身抗原成分发生免疫反应，但对这些主要定位在线粒体内膜，对胰蛋白敏感的蛋白质的生化本质仍不清楚。1987年Gershwin ME等首次克隆出70kD线粒体自身抗原的。DNA，并测定了其氨基酸序列，此后证实所表达的融合蛋白是线粒体酶的亚单位丙酮酸脱氢酶复合物E2 (pyru-vate dehydrogenase complex E2, PDC-E2)成分。1988年Van de Water和Fussey领导的两个不同的研究组分别发现，PBC患者中AMA识别的靶抗原主要为 2-酮酸脱氢酶复合物(2-oxoacid dehydrogenase complex, 2-OADC)成分。现已证实，在线粒体内膜中归属2-OADC的丙酮酸脱氢酶家族包括三类:①丙酮酸脱氢酶复合物(PDC) ;②支链 a一丙酮酸脱氢酶复合物(BCOADC) ; O酮戊二酸脱氢酶复合物(OGDC)。上述三类酶复合物均属高度保守蛋白，由以下3种酶亚单位重复组成:①底物特异的脱竣酶;②二氢硫辛酞胺转乙酞酶(E2); O二氢硫辛酞胺脱氢酶(E3)。其中以E2亚单位复合物(PDC-E2 , BCOADC-E2, OGDC-E2)为靶抗原的自身抗体对PBC的诊断具有重要的临床意义。此外，E1和E3亚单位复合物的自身抗体对PBC亦有诊断价值(表23一3)0 1995年Berg等根据在线粒体膜上存在的能与AMA反应的9种线粒体自身抗原，将AMA分为9种亚型(AMA Ml --AMA M9)，不同的亚型其临床意义存在差异，其中与 PBC最相关的是M2亚型抗体。应用生化方法从线粒体内膜中提取的被称为M2的线粒体成分，由5种抗原决定簇组成，其主要成分为PDC-E2，还包括PDC-E3BP、BCOADC-E2、PDC-E 1 a及 PDC-Elp等成分(表23一3)。除M2抗原外，在线粒体外膜还含有M4 , M8和M9等抗原亦与PBC密切相关(表23一4). AMA亚型抗体检测极大提高了AMA对PBC诊断的敏感性和特异性。

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   一、检测方法   

      AMA传统的最常用的检测方法是以动物组织(如鼠肾或肝/胃/肾复合组织等)为抗原底物的间接免疫荧光法(IIF)(彩图23一11)，该方法简便易行，但有其局限性:10 M4 , M7 , M8和M9等亚型抗原的抗体不能用 IIF检出;②易受与细胞浆线粒体外其他抗原成分反应的自身抗体干扰而出现假阳性，如抗核糖体P蛋白抗体(抗rRNP抗体)、抗 LKM抗体等;③敏感性、特异性低于以纯化的线粒体亚型成分为靶抗原的抗体检测方法;④不能分型，临床应用价值低于AMA特异性亚型抗体检测。目前，对PBC有重要诊断价值的抗 M2 , M4或 M9亚型抗体已逐渐应用于临床常规检测，市场上有多种ELISA或免疫印迹法检测商品试剂盒可供选用。现多数实验室检测 AMA采用 IIF法进行初筛，AMA阳性再应用ELISA法或免疫印迹法进行分型，主要检测AMA-M2亚型抗体。因ELISA法或免疫印迹法检测的敏感性略高于 IIF法，约5%的患者血清应用IIF法检测阴性，而用ELISA法或免疫印迹法检测则为阳性或弱阳性，故提倡 AMA检测时联合使用 IIF法和亚型抗原特异性的酶免法、免疫印迹法等，可以提高AMA临床疾病诊断的敏感性和特异性。

   二、临床意义   

      AMA为一组可同线粒体内膜或外膜上多种酶复合物成分相结合的自身抗体的总称。虽然应用传统的IIF法检测PBC患者血清中的AMA,敏感性可达90%以上，但 AMA也可出现于某些感染性疾病、结缔组织病及药物诱导性疾病患者中(表 23一4)。靶抗原特异性AMA亚型抗体的临床应用，提高了AMA对疾病诊断及鉴别诊断的临床应用价值。

      以线粒体内膜上的2-酮酸脱氢酶复合物为靶抗原的AMA M2亚型抗体，是PBC患者的高度特异性 自身抗体，敏感性为 95%一98 ，特异性为86% -97%。有学者认为当AMA M亚型抗体高滴度时，确诊 PBC不再需要肝活检组织病理证实。PBC早期AMA常为低滴度，随着病情进展，AMA可逐渐升高，但其滴度高低与疾病严重度或预后并不相关。此外，一些线粒体外膜抗原的亚型抗体，如AMA M4,AMA 1VI8和AMA M9也与PBC密切相关。抗 M4, M8 , M9抗体在PBC患者中的检出率相对抗M2抗体低一些，其中，抗M4抗体和抗M8抗体多伴抗M2抗体，抗M9抗体部分伴抗 M2抗体，部分可单独出现。有文献表明，AMA M4, AMA M8和 AMA M9与PBC患者的早期诊断及疾病预后有一定关系。