目前已有多种方法用于人血清中自身抗体的检测及定量。以下是有关这些方法的简要描述。如需更加详尽的信息，读者可参阅文献Rose NR等主编的“Manual of Clinical Labora-tory Immunology"。  

      1.免疫荧光法   

      间接免疫荧光法已在ANA筛查中讨论过(图21一2)。免疫荧光法也用于检测抗 DNA抗体(短膜虫法检测)，检测步骤类似于ANA的检测。为获得半定量数据，可将血清样本进行连续稀释(1二40,1:80,1:160,1:320,1:640,1:1280等)。检测ANA和抗 dsDNA抗体的荧光滴定法在某种程度上带有主观倾向，因为它需要通过视觉判断截点。为减少荧光测定法的主观误差，研究出了滴定效价法。对抗 dsDNA抗体测定来说，用绿蝇短膜虫测定盒做筛查可用1:10稀释的血清。凭借能从每一个样本的单次稀释中获得多个影像(image)，滴定效价法被用于模拟传统的滴定法。通过改变曝光时间，一架安置于显微镜上的摄像机可自动获得模拟连续稀释的不同影像，从而产生一个“图像滴度(image titer) "。用稀释到1:10,1:40,1:160及1:640的参照血清制作出标准曲线。结果具有可重复性，且可能比视觉判断的结果更精确。   

      2.酶联免疫吸附测定法(ELISA )   

      ELISA法是一种简单、快速和敏感的方法，普遍用于筛查。但最好的做法是，在应用ELISA法进行筛查的同时，用特异性高的检测方法进行确认。在有许多小孔的高亲和性(氧化聚苯乙烯)微量滴定板(目前最常用的为 %孔板)上包被纯化的抗原，将稀释的待测血清及酶标的抗免疫球蛋白抗体加人加样孔中。结合的二抗通过加人的底物形成有颜色的产物，用分光光度计测定吸光度可以半定量自身抗体的水平。基于其高敏感性，对ELISA法必须认真实施标准化检测，以避免非特异结合。   

      3.免疫双扩散和对流免疫电泳   

      免疫双扩散(二维双向扩散)是通过把抗原和抗体加入琼脂糖凝胶孔中进行的。每个反应物都通过凝胶放射状扩散，浓度随距孔远近的函数关系逐渐递减。抗原抗体在各自浓度大致相近时相遇，于该处形成一条由免疫复合物形成的不溶性沉淀线。凝胶中的沉淀线可直接看到。如果两个血清样本含有特异性相同的抗体，它们的沉淀线融合而形成一条弯曲的“同一性线(line identity) "。免疫双扩散法广泛地用于检测抗Sm、抗nRNP、抗Ro (SS-A )、抗La(SS-B),抗拓扑异构酶I及抗核糖体P抗体。但是，它需要投人较多的人力，且敏感型较诸如ELISA等其他方法低。    对流免疫电泳比免疫双扩散法敏感。酸性抗原和血清免疫球蛋白相向电泳，形成沉淀线。其优点是使免疫双扩散法测试中无法区分的多条线被区别开来。但是，由于非免疫沉淀线的形成，故使结果的解释复杂化。   

      4.蛋白印迹法   

      在免疫印迹(蛋白质印迹)技术中，蛋白质从粗提或纯化的抗原制备物中依据分子量的不同藉 SDS一聚丙烯酞胺凝胶电泳被分离开，随后被转移到如硝酸纤维膜的膜上。将膜用稀释的待测血清孵育，然后加人酶标二抗。酶作用于底物形成有色的、不溶性的反应产物，沉淀于膜上。用放射或化学发光检测也可评估待测血清与复杂的混合物中单个蛋白的反应。这一技术的敏感性很高，但技术要求也很高。本法主要的缺点是许多抗原决定簇的构象(conforma-tional)有可能在SDS一聚丙烯酞胺凝胶电泳的过程中遭到破坏。   

      5.免疫沉淀法   

      对有放射标记的细胞提取物行免疫沉淀是检测自身抗体特异性的重要研究工具。放射性标记的抗原可与自身抗体形成免疫复合物，这种免疫复合物可在蛋白A琼脂糖凝胶微粒上进行纯化。从凝胶微粒上洗脱下来的蛋白用SDS -聚丙烯酞胺凝胶电泳分离，再用放射自显影法检测。这个测试方法可以检测多种与系统性自身免疫病相关的自身抗体。通过与参照血清发生免疫沉淀反应的蛋白作分子量比较，可确定有放射性标记的抗原的性质。相似的方法可用于分析能被人自身抗体识别的核糖核蛋白中放射性标记的核酸成分。