许多系统性自身免疫病可产生自身抗体。在狼疮主要是直接针对核抗原产生的抗体，当然也有其他抗体存在。抗核抗体(ANA)的荧光分析操作简单并具有很高的敏感性，95%以上的SLE患者均为阳性。它检测的是血清中抗核成分和抗胞浆成分的抗体。虽然最初应用鼠肝或肾切片作底物，但是人贴壁细胞系的HEp-2人喉癌)细胞是最适合的底物。图21-2描述了进行荧光ANA分析的步骤:将细胞置于显微镜载玻片上，用甲醇固定并使细胞的通透性增高，然后用人血清进行孵育。在进行下一个步骤之前洗涤玻片，以去除未结合的抗体，然后用荧光素(异硫氰酸荧光系)标记的抗免疫球蛋白抗体孵育。将载玻片置于荧光显微镜下，观察用不同稀释倍数的血清孵育下胞核和胞浆荧光染色的强度及核型。不同类型的自身抗体产生不同的荧光核型。

      

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      抗核抗体检测通常是免疫诊断(immunodi-agnosis)诸如SLE等系统性自身免疫病的第一步。尽管免疫荧光法是标准方法，但是选择ELISA等其他方法更易于实施自动化检测，不过后者的结果可能不够精确。

      1. ANA免疫荧光检测   

      彩图21一3 (A-F)是ANA免疫荧光检测得到的一些典型染色核型(均质型、斑点型、胞浆型、着丝点型、核仁型)，其他核型比较少见。核型的不同反映了标本血清中存在针对不同核抗原的自身抗体。核仁型(彩图21一3E)提示诊断硬皮病;着丝点型(彩图21一3D)与局限性硬皮病相关，尤其是与该病的一个亚型CREST综合征(钙化、雷诺现象、食管运动功能障碍、指端硬化、毛细血管扩张)相关;均质型和斑点型(彩图 21一3A, B)诊断疾病的特异性较低。ANA免疫荧光技术也可用于检测与胞浆抗原发生反应的自身抗体，如抗核糖体 p抗体(彩图21一3C)、抗信号识别颗粒抗体(彩图21一3F)、抗组氨酞t RNA合成酶抗体(Jo-1)以及抗线粒体抗体。  

      2 . ANA免疫荧光检测的敏感性和特异性   

      用人HEp-2细胞作底物，ANA阳性诊断SLE的敏感性是90%一98%。事实上，几乎100%的硬皮病患者ANA为阳性。干燥综合征、多发性肌炎/皮肌炎的ANA阳性率也很高。与其高度的敏感性相反，ANA阳性对于狼疮诊断的特异性相对较低，其阳性预测值仅为ll%--13%。一项来自澳大利亚的研究发现，18.8%ANA阳性者为SLE,10 . 9%为药物性狼疮，21.7%为其他系统性自身免疫病(如干燥综合征、肌炎、硬皮病),10.1%为自身免疫性甲状腺炎，5.8%为器官特异性自身免疫病，8.3%为感染，2.9%为肿瘤,24.3%为其他情况或特发性自身抗体。需注意的是，一些健康人也可出现低滴度的ANA。在随机抽取的健康白种人中，ANA的阳性率为 3%-5%. ANA的出现与年龄有很强的相关性，年龄在65岁以上的健康人ANA阳性率可升至 10%一37%。尽管ANA在健康人中并不少见，但其滴度一般在 1:160以下。曾有报道，在滴度为 1 320时，正常人ANA的阳性率为3.3%，而在滴度为1:40时，其值将升至31.7%(图21一4)。总之，对于诊断SLE, ANA检测的阳性预测值较低;相反地，如患者ANA阴性，则患SLE的可能性低于3%。因此，尽管ANA对于确诊SLE有一定的局限性，但ANA阴性有助于排除狼疮诊断。

      

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      3 . ANA免疫荧光染色的解释   

      能否正确解释ANA免疫荧光的染色结果有赖于观察者，故需对他们进行训练。即使经过训练的观察者，也存在实验室之间的差异。在一项研究中发现，当稀释度为1 320时，实验室之间的变异系数为36 ，而稀释度为1:40时，则为51%。尽管如此，在大多数情况下，这一检测仍可将正常人与SLE、硬皮病或干燥综合征等区别开来。在血清稀释度为1 : 160时，其敏感性和特异性可达最佳值。在这一稀释度，各疾病分类的正确率分别为SLE 95 %、硬皮病87%、干燥综合征74%。另外，95%的健康对照可被正确地鉴定出来。因此同时报告血清稀释度为1:160和1:40时的ANA检测结果可能会有一定的价值。

       4. ELISA法检测ANA  

      为减少投人参与ANA免疫荧光检测的人力，正逐渐发展出自动检测ANA的ELISA法。这一方法利用核抗原粗提物或与狼疮或其他疾病相关的自身抗体识别的纯化抗原的混合物作为抗原。应用核抗原粗提物有一弱点，即不易监测每种抗原与塑料孔壁的结合，而且那些不能溶解的核抗原如核纤层蛋白A,B,C在提取过程中会被丢失，因而无法制备。DNA与细胞壁的结合也是不恒定的。应用核抗原粗提物的另一缺点是不能获得 ANA核型所提供的信息。在对六种 ELISA法与荧光抗 核抗体(FANA)进行的一项比较中发现检测结果有本质的差别，当然也有一致性很好的报道。决定应用何种方法尚需进行进一步研究，根据目前的情况，尚不能废弃标准化但需大量人力的荧光ANA方法。