目前检测 RF常用方法有凝集试验、浊度散射比浊法和酶联免疫吸附试验。血清中大部分RF或以自由形式存在，或和正常IgG分子结合形成可解离性的不稳定免疫复合物;但有相当一部分高亲和力RF，一旦合成分泌后，即与自体IgG分子结合形成稳定的免疫复合物，或是沉淀于器官组织，或是被网状内皮系统清除，因而各种检测结果不能准确反映患者的RF合成情况。在部分RA患者，尤其幼年类风湿关节炎患者，常规凝集试验阴性;但当用凝胶过滤或酸解离技术将IgM-RF和自身IgG分子分离时，再用凝集试验则可测出IgM-RF，因而就出现了隐性 RF (hidden RF)一词。同样地，酶联免疫吸附试验和浊度散射比浊法也不能检测出隐性RF。

   一、凝集反应   

      凝集试验检测RF的原理是通过IgM-RF多价性交联乳胶颗粒或红细胞表面IgG分子，产生肉眼可见的凝集物。此方法主要检测IgM-RF，而IgG-RF难以用此法检测，因为单体IgG-RF不能有效地凝集IgG分子包被的乳胶颗粒或红细胞，并且由于血清中高浓度 IgG分子以及IgG-RF的自身结合趋向更增加了此法检测IgG-RF的困难。  

     1.乳胶凝集试验   

      乳胶凝集试验是检测IgM-RF最常用的简便易行方法，乳胶颗粒用人IgG分子包被。不过，该试验也自身的缺陷，包括:①人IgG制剂通常为血清Cohn II部分，其中含有某些凝集成分(这是为了产生最佳凝集效果)，这些Cohn II制剂中IgG分子的凝集程度可引起实验结果差异;②乳胶颗粒的大小和性质也直接影响实验结果;③血清中Clq可凝集IgG包被的乳胶颗粒，因而未经热灭活的血清，可出现假阳性或高滴度阳性结果;④由于乳胶颗粒是用人IgG包被的，因而非RF性抗免疫球蛋白抗体也可出现阳性结果，这种情况可见于输血或妊娠引起的异体免疫球蛋白免疫;⑤由于乳胶颗粒是用混合性IgG亚类分子包被的，因而可检出较多特异性的IgM-RF。

      2.致敏羊红细胞凝集试验  

      用亚凝集量兔抗羊红细胞IgG抗体致敏绵羊红细胞，IgM-RF交联绵羊红细胞表面IgG分子可产生羊红细胞的凝集。但在检测血清IgM-RF之前，必须清除被检血清中的异嗜性抗红细胞抗体，或者用未致敏的羊红细胞作阴性对照，不然可出现假阳性结果。由于在此检测系统中，绵羊红细胞用兔IgG分子包被，因而不能检出仅对人IgG特异的IgM-RF;但此法较乳胶凝集试验对RA诊断更为特异，因RA特异性RF几乎总是和兔IgG分子发生反应，而其他疾病的RF很少与兔IgG分子反应。

   二、浊度散射比浊法

      浊度散射比浊法是测定血浆、血清、尿液等体液蛋白成分常用的免疫生化方法，浊度散射比浊法测定RF的基本原理为待血清中的RF与包被IgG分子的乳胶反应形成免疫复合物，由二极管生发的激光(波长830nm左右)通过比色杯检测反应体系中免疫复合物的浊度，由于应用了乳胶颗粒，免疫复合物直径在1000nm左右，大于光的波长，使光主要向前方散射，提高了测定效果，在乳胶颗粒包被IgG分子浓度过量的情况下，散射光强度与反应体系中的免疫复合物量，以及相应RF浓度成比例，根据标准曲线推算出RF浓度。目前浊度散射比浊法测定RF已经自动化，应用特定蛋白分析仪BNProSpe。系统测定，应用国际参考校准样，结果为可比性国际单位 IU/mL。此方法提供了较为准确的RF总量情况，可测定包括IgM-RF,IgG-RF, IgA-RF等在内的各型RF。测定方法已自动化且较为简便，测定系统国际标准化，因而测定结果具有国际可比性;但不能(如ELISA法)分型测定RF，同凝集反应一样，血清中Clq、非RF性抗免疫球蛋白抗体也可出现假阳性，甚至高滴度阳性结果。

   三、酶联免疫吸附试验

      凝集试验的阳性结果是用血清滴度表示的，即用被检血清的一系列稀释倍数表示，所得的试验结果高于或低于观察终点稀释度(误差为上下一个倍比稀释度)，因而凝集试验并不是准确的定量试验。近年来各种定量检测RF的固相方法已发展起来，如酶联免疫吸附试验(ELISA)，其基本原理为人或动物IgG分子通过共价键或化学交联吸附到固相介质微孔酶标板上，加人待检血清共育，使固相化IgG分子尽量和血清中全部RF结合，冲洗掉未结合的血清蛋白，然后加入酶标抗IgM抗体或抗IgG抗体或抗IgA抗体，分别检测出IgM-RF, IgG-RF和IgA-RF，根据结合RF的标记抗体量，推算出各类 RF的血清含量(IU/ml)。此方法是假定血清中的所有RF如同标准制剂一样以同样的方式和固相化IgG分子结合。  

      ELISA法可检测出 IgM-RF, IgG-RF和IgA-RF等多种类型RF。由于IgA-RF, IgG-RF对 RA更特异，因而 ELISA法检测对 RA诊断，尤其对早期RA诊断意义较大。ELISA法能够较为准确地对RF定量，提示一些新情况。

      ELISA法检测 RF有下列缺点:O ELISA法检测RF标准化仍不满意，商业化试剂盒生产有许多技术困难。②血清IgM-RF可造成IgG-RF, IgA-RF假阳性，这是由于IgM-RF具有多价性，可同时结合包被IgG,酶标抗IgG抗体或抗IgA抗体F。段。此不足可通过将酶标抗体酶解为F(ab')2形式得以解决。即使如此，IgM-RF仍可造成IgG-RF假阳性，这是由于IgM-RF同时结合包被IgG、血清其他自由形式IgG分子和可溶性免疫复合物中IgG分子，此不足可通过还原剂降解IgM-RF的多价性解决。O ELISA检测过程中的冲洗步骤可洗除与固相化 IgG结合的低亲和力RF，冲洗之后，仅部分IgM-RF, IgG-RF, IgA-RF仍结合在固相IgG分子上，此不足可用纯IgM-RF,IgG-RF和IgA-RF作为标准得到部分解决。

     上述各种检测方法各有优缺点，但直至目前，RF的检测仍没有统一标准化。这是因为:①各实验室检测 RF方法不同，有不同检测结果;②即使用同一种检测方法如凝集试验、ELISA，各实验室检测出的RF滴度结果亦无可比性;O RF正常(阴性)和升高(阳性)的分界点难以统一确定，分界点值(cut-off points)的确定常取决于各实验室应用的参考血清，应用参考血清需注意其他风湿性疾病、慢性感染性疾病甚至老年人，这些人群RF可能升高。