幼年类风湿性关节炎与人细小病毒B19感染的关系及其临床特征

　　人细小病毒B19（简称B19）是近年来发现的人细小病毒属中对人类致病的单链线状DNA病毒。1985年White和Reid等首次报道B19感染与人类关节病相关，随后国外的许多文献报道B19不仅可致急性关节炎，而且可引起成人慢性关节炎或类风湿性关节炎（RA）或幼年类风湿性关节炎（JRA）。目前国内尚未见有关B19感染与JRA的相关报道。本研究旨在探讨我国JRA 患儿B19感染情况，以及与JRA相关关系及临床特征。

资料和方法

　　一、标本来源
　　来自1995年8月～1999年3月我院儿科、西安市儿童医院因JRA 住院和门诊患儿的血清(BS)标本共30例，其中男23，女7，年龄2～14岁；另有26例JRA患儿骨髓（BM）标本来源于1992年2月～1999年3月，由我院血液室提供；4例关节液（SF） 标本通过穿刺或关节镜留取，来自1998年6月～1999年3月。对照组BS标本25例（健康献血员15例，本院工作人员子女10例），均自静脉采血，分离血清-20℃冰箱保存备用待检。10例对照组BM标本为缺铁性和巨幼细胞性贫血患儿。
　　诊断标准及分型：根椐中华儿科杂志1996年第34期第4卷关于JRA的诊断及分型建议；活动期标准：临床症状+体征+血沉增快。
　　本组除2例为门诊病例外，其余均为住院患儿,且处于活动期，其中BS组30例中JRA全身型9例，多关节型11例，少关节型10例。BM组26例中JRA全身型16例，多关节型5例，少关节型5例。
　　二、方法
　　1．主要试剂及引物：10×PCR 缓冲液和Taq DNA聚合酶（复华公司），4×dNTP(脱氧三磷酸核苷)和琼脂糖（美国Perkin Elmer Cetus公司），蛋白酶K（美国Merck公司）。PGEM Markor (华美公司)。引物由上海生工生物工程公司合成，外引物：1S对应于B19-DNA碱基位置为2905-2924；2A对应于4016-3997，循环产物1112 bp，引物碱基顺序为1S 5′-CTTTAGGTATAGCCAACTGG-3′；2A 5′-ACACTGAG-TTTACTAGTGGC-3′。内引物： 3S对应于B19-DNA碱基位置为3187-3206，4A对应于3290-3271，扩增产物104 bp，引物碱基顺序为3S 5′-CAAAAGCATGT-GGAGTGAGG-3′，4A 5′-CCTTATAATGGTGCTCTGGG-3′。病毒来源：B19阳性对照模板由沙特皇家医院研究中心提供，经提纯后含量为70 μg/L。
　　2．BS标本DNA提取：方法按参考文献［1］介绍的方法进行。待检标本-20℃冰箱取出解冻，取50 μl加入裂解液100 μl中 (10×50 mmol氯化钾，10×0.45% NP-40，10×0.45%吐温-20，10×10 mmol 三羟甲基氨基甲烷*盐酸，pH值8.3，10×2.5 mmol 氯化镁，10×0.1 mg/ml明胶等各10 μl，蛋白酶K 20 μg，均经高压灭菌），振荡混匀，水浴箱依次65℃ 1 h充分消化，95℃ 10 min灭活蛋白酶K，离心（15 000 r/min）15 min，取上清-20℃冰箱保存。